asyan.org
добавить свой файл
1






CITO TEST CEA



Тест імунохроматографічний для

виявлення ракоембріонального антигену в

цільній крові, сироватці, плазмі (касета)

Інструкція

Пояснення тесту

Ракоембріональний антиген (РЕА) є онкомаркером, який представлений онкоембріональним глікопротеїном. РЕА синтезується в значній кількості при злоякісних пухлинах, особливо при онкозахворюваннях легень та шлунково-кишкового тракту (наприклад, раку товстого кишечника, раку печінки та раку легень). РЕА в нормі синтезується клітинами шлунково-кишкового тракту плоду до рівня визначення в сироватці і зникає після народження дитини. Тому, підвищений рівень РЕА є суттєвим в діагностиці первинних карцином, а також використовується для моніторингу динаміки онкозахворювання. Клінічні дані вказують на те, що рівень РЕА може використовуватися в якості прогностичного маркеру перебігу онкозахворювання до і після проведеної терапії. Прогресивне підвищення вмісту РЕА може свідчити про рецидив пухлини за 3-36 місяців до клінічного виявлення метастазів. Стійке підвищення рівня РЕА після проведеної терапії є значимим показником прихованих метастазів, залишкових явищ хвороби та недостатньої ефективності проведеного лікування.

В тесті на виявлення РЕА використовується комбінація рухомих та іммобілізованих на мембрані антитіл до РЕА для селективного виявлення РЕА в цільній крові, сироватці та плазмі. Пороговий рівень визначення становить 5 нг/мл.

Принцип тесту

Тест на виявлення РЕА є якісним, мембранним, імунохроматографічним аналізом для виявлення РЕА в цільній крові, сироватці чи плазмі.

Під час тестування цільна кров, сироватка чи плазма мігрує по капілярам мембрани, вступає в реакцію із заздалегідь нанесеними на мембрану антитілами до РЕА в результаті чого утворюється кольорова лінія. Наявність такої лінії на тестовій ділянці мембрани вказує на позитивний результат, в той час як відсутність її - на негативний результат тестування.

Червона лінія, котра буде завжди з’являтися на контрольній ділянці, є контролем виконання процедури і свідчить, що достатня кількість зразку була використана і заповнення капілярів мембрани відбулося.

МАТЕРІАЛИ

Надані матеріали

  • Тест

  • Одноразова піпетка

  • Буфер

  • Інструкція

Необхідні, але не надані матеріали

  • Пробірки

  • Центрифуга

  • Ланцети (тільки для цільної крові з пальця)

  • Гепаринізовані капілярні трубочки (тільки для цільної крові з пальця)

  • Годинник

Зберігання

Тест необхідно зберігати у холодильнику або при кімнатній температурі від 2 до 30°C. Тест зберігає стабільність до моменту закінчення терміну придатності, що вказаний на запаяному пакеті. Тест повинен знаходитися у запаяному пакеті до моменту використання. Не заморожувати. Не використовувати по закінченню терміну придатності. Термін придатності 24 місяці.

Застереження

  1. Для професійної in vitro діагностики. Не використовувати після закінчення терміну придатності. Тест повинен знаходитися у запаяному пакеті до моменту використання.

  2. Не палити, не пити, не їсти в місці знаходження зразків та тест-систем.

  3. Не використовувати тест, якщо була порушена цілісність упаковки.

  4. Поводитися зі зразками необхідно як з потенційно інфікованим матеріалом. Дотримуйтесь встановлених мір безпеки відносно мікробіологічного ризику та виконуйте стандартні заходи по знищенню зразків.

  5. При роботі зі зразками необхідно носити захисний одяг: халат, рукавиці та окуляри.

  6. Волога та температура можуть вплинути на результат тесту.

Забір зразку і зберігання

  • Тест для виявлення РЕА (цільна кров/сироватка/плазма) досліджує цільну кров (з вени або пальця), сироватку, або плазму.

  • Для забору цільної крові з пальця:

    • Помити руки пацієнта теплою водою з милом або протерти змоченою у спирті ваткою. Висушити.

    • Рухами від зап'ястя до кінчиків пальців, розім'яти середній або безіменний пальці, не торкаючись місця проколу.

    • Проколоти шкіру стерильним ланцетом. Витерти першу краплю крові.

    • М'яко масажуючи руку від зап'ястя до пальців, досягти утворення достатньої краплі крові.

    • Використовуючи піпетку, додайте краплю цільної крові з пальця у лунку S на тест-системі:

      • Набрати у піпетку приблизно 50 l крові. Уникайте утворення бульбашок.

      • Піпетку стиснути та видавити всю кров у лунку (S) на тест-касеті.

    • Додавання цільної крові з пальця пацієнта шляхом стікаючої краплі:

      • Підвести палець пацієнта над лункою (S) на тест-касеті.

      • Капнути дві краплі крові з пальця у центр лунки (S), або доторкнутися стікаючою краплею на пальці безпосередньо центру лунки. Уникати прямого контакту пальця з лункою (S).

  • Відділити сироватку і плазму як можна швидше, щоб уникнути гемолізу. Використовувати тільки чисті негемолізовані зразки.

  • Тестування провести негайно після забору зразка крові. Не залишати зразки на довгий час при кімнатній температурі. Зразки сироватки та плазми можуть зберігатися впродовж 3 днів при температурі від +2 до +8°C. Для довготривалого зберігання - при температурі нижче -20°C. Цільна венозна кров може зберігатися при температурі від +2 до +8°C та використовуватися для тестування впродовж 2 днів після забору. Не заморожувати зразки цільної крові. Цільну кров, яка взята з пальця, використати для тестування негайно.

  • Перед тестуванням довести зразки до кімнатної температури. Розморозити замороженні зразки та ретельно перемішати перед тестуванням. Зразки не можна заморожувати та розморожувати декілька разів.

  • У випадку перевезення, зразки необхідно упаковувати згідно із санітарними вимогами.

Процедура тестування

Доведіть тест, зразки, буфер до кімнатної температури (15-30°С) безпосередньо перед тестуванням.

  1. Дістаньте тест із запаяного пакету і використайте як можна швидше для отримання кращого результату.

  2. Покладіть тест на чисту та рівну поверхню.

  3. Для зразків сироватки чи плазми: тримаючи піпетку вертикально, додайте 1 краплю зразка (приблизно 25 мкл) у лунку S на тест-касеті, потім додайте 1 краплю буферу (приблизно 40 мкл) і зазначте час.

  4. Для зразків цільної крові з вени: тримаючи піпетку вертикально, додайте 2 краплі зразка (приблизно 50 мкл) у лунку S на тест-касеті, потім додайте 1 краплю буферу (приблизно 40 мкл) і зазначте час.

  5. Для зразків цільної крові з пальця:

  • використовуючи піпетку, додайте 2 краплі зразка (приблизно 50 мкл) у лунку S на тест-системі, потім додайте 1 краплю буферу (приблизно 40 мкл) і зазначте час.

  • використовуючи метод стікаючої краплі: дозвольте упасти 2 краплям крові з пальця (приблизно 50 мкл) у центр лунки (S) на тест-касеті, потім додайте 1краплю буферу ( приблизно 40 мкл) і зазначте час.

  1. Почекайте поки червона лінія чи лінії з”являться. Результат слід перевірити через 5 хвилин. Не приймайте до уваги результат тесту після 20 хвилини.



Інтерпретація тесту

Результат позитивний*: з’являються дві червоні лінії. Одна лінія повинна з’явитися на контрольній ділянці (С), а друга лінія повинна бути на тестовій ділянці (Т).

*УВАГА: інтенсивність забарвлення червоної лінії на тестовій ділянці (Т) може змінюватися, в залежності від концентрації РЕА в зразку. Тому, поява лінії іншого відтінку червоного кольору в ділянці Т повинна розглядатися як позитивний результат.

^ Результат негативний: одна червона лінія з’являється на контрольній ділянці (С). Лінія червоного чи рожевого кольору відсутня на тестовій ділянці (Т).

Результат недійсний: контрольна лінія не з’являється. Недостатня кількість зразку була використана чи не дотримана процедура тестування. Повторіть тестування, використовуючи новий тест.

^ КОНТРОЛЬ ЯКОСТІ

Тест має внутрішній контрольний пристрій. Червона лінія, яка з”являється на контрольній ділянці (С), є тим самим внутрішнім контрольним пристрієм. Вона підтверджує достатню кількість використаного зразку і правильну техніку проведення тестування.

Контрольні стандарти не додаються до даного тесту. Проте, рекомендується щоб позитивні і негативні контролі використовувались для перевірки правильності роботи тесту, керуючись положеннями належної лабораторної практики.

Обмеження тесту

  1. Тест для виявлення РЕА (цільна кров/сироватка/плазма) використовується для in vitro діагностики. Тест повинен використовуватися для виявлення РЕА в зразках сироваток, плазми чи цільної крові. Тест є якісним аналізом, тому за допомогою його не можливо визначити кількісний вміст чи ступінь підвищення концентрації РЕА в зразку.

  2. Тест лише вказує на наявність РЕА в зразку і не повинен бути єдиним критерієм діагностики онкозахворювань.

  3. За допомогою даного тесту не можливо визначити наявність РЕА в зразку, якщо його рівень становить менш ніж 5 нг/мл.

  4. Як і в усіх випадках діагностики, результат тесту повинен розглядатися у сукупності з усією клінічною інформацією, доступною лікарю.

  5. Якщо результат тесту негативний, але клінічні симптоми захворювання наявні, рекомендується додаткове тестування, використовуючи інші методи діагностики. Одержаний негативний результат не виключає можливості присутності онкозахворювання.
^

ХАРАКТЕРИСТИКИ РОБОТИ ТЕСТУ


Чутливість та специфічність

Тест для виявлення РЕА (цільна кров/сироватка/плазма) при порівнянні з провідними комерційними тестами ІФА на виявлення РЕА показав чутливість 98,7% та специфічність 99,2%.


Метод

ІФА

Загальний результат

Тест на РЕА

Результат

Позит.

Негат

Позитивний

154

3

157

Негативний

2

390

392

Загальний результат

156

393

549
Відносна чутливість: 98.7% (95.4%-99.8%)*

Відносна специфічність: 99.2% (97.8%-99.8%)*

Точність: 99.1% (97.9%-99.7%)*

* 95% інтервал довіри

Точність

Внутрішньосерійне дослідження точності

Збіг результатів ряду вимірів був визначений, використовуючи 10 копій 3 зразків, які містили негативний, слабо позитивний і різко позитивний вміст РЕА. Негативні і позитивні результати були правильно визначені в 99% випадків.

^ Міжсерійна дослідження точності

Збіг результатів ряду вимірів був визначений 10 незалежними дослідженнями, використовуючи ті ж 3 зразки, які містили негативний, слабо позитивний і різко позитивний вміст РЕА. Три різні партії тесту для виявлення РЕА (цільна кров/сироватка/плазма) оцінювалися, використовуючи негативні, слабо позитивні і різко позитивні зразки на вміст РЕА. Результати були правильно визначені в 99% випадків.

^ Перехресна чутливість

Зразки, які містили віруси гепатиту С, В, ВІЛ та АФП, ревматоїдний фактор (РФ) були протестовані тестом на виявлення РЕА. Під час дослідження перехресної чутливості до них не було виявлено, що підтверджує високу специфічність тесту стосовно виявлення РЕА.

^ Чутливість до побічних речовин

Тест на виявлення РЕА був досліджений на зразках візуально гемолізованих та з високим вмістом ліпідів. Втручання побічних речовин, які містилися в даних зразках, не було виявлено. В доповнення були досліджені тестом на виявлення РЕА зразки, які містили 2,000 мг/дл гемоглобіну, 30 мг/дл білірубіну, 700 мг/дл тригліцерідів та 1,700 мг/дл загальних ліпідів. Втручання даних речовин на результати тестування також не було виявлено.

Бібліографія


1. Gold P and Freedman SO. Demonstration of Tumor-specific antigens in human colonic

carcinomata by immunological tolerance and absorbtion. J. Exp. Med. 121:439, 1965.

2. Banjo C, Gold P, Freedman SO and Krupey J. Immunologically Active Heterosaccharides of the Carcinoembryonic Antigen (CEA) of the Human Digestive System, Nature, New Biol, 238,183, 1972.

3. Darcy DA, Turberville C, and Janes R. Immunological Study of Carcinoembryonic Antigen (CEA) and Related Glycoprotein, Br.J.Cancer, 28,147, 1973.

4. Phil Gold CC, and Goldenberg NA. The Carcinoembryonic Antigen (CEA): Past, Present, and Future. Perspectives in Colon and Rectal Surgery 9(2), 1996.


ПОСТАЧАЛЬНИК:


ACON Biotech Co., Ltd

ДИСТРИБУТОР:


ТОВ “Фармаско”. ЛАБОРАТОРІЯ В КИШЕНІ

04655, Україна, м.Київ, вул.В.Хвойки, 21

тел.: +38 (044)537-08-04

www.pharmasco.com,

e-mail: contact@pharmasco.com