asyan.org
добавить свой файл
1



CITO TEST FOB-Transferrin

Тест для виявлення гемоглобіну

та трансферину у калі



ІНСТРУКЦІЯ
Використання

Тест для виявлення гемоглобіну (Hb) та трансферину (Tr) у калі є однокроковим імунохроматографічним аналізом для якісного виявлення гемоглобіну та трасферину у зразках калу з метою виявлення шлунково-кишкової кровотечі.
Введення

Колоректальний рак є однією з головних причин смерті в світі при онкопатології. Скринінг захворювань базується на тому, що новоутворення товстого кишечника (такі як рак на ранній стадії розвитку та великі аденоматозні поліпи) кровоточать і тому можуть бути виявлені за допомогою тесту на приховану кров у калі. При шлунково-кишковій кровотечі в кал потрапляє непошкоджений чи майже непошкоджений гемоглобін (непошкоджений гем та похідні гему порфірини) в кількості, яка залежить від кровотечі, місця її утворення та часу проходження через кишечник. Імунохімічні тести виявляють непошкоджений чи майже непошкоджений людський гемоглобін та є дуже специфічними аналізами на виявлення кровотечі з нижніх відділів кишечника тому, що кров з цих відділів менш піддається руйнуванню під час проходження по шлунково-кишковому тракту (ШКТ). Гемоглобін у калі не є стабільною речовиною, тому може стати причиною отримання хибнонегативних результатів. Визначення трансферину у калі, що є більш стійким, ніж гемоглобін, надає додатковий напрямок для діагностики захворювань ШКТ – верхніх відділів.

Трансферин є похідним компонентом крові і може потрапляти у ШКТ і потім виводитись з калом у випадку захворювань, що супроводжуються кровотечею з ШКТ. Трансферин стабільний у калі та є хорошим маркером діагностики кровотеч ШКТ.

Даний тест одночасно визначає гемоглобін та трасферин у зразках калу, надаючи більш точні результати.
Принцип тесту

Тест для виявлення гемоглобіну та трансферину у калі є якісним імунохроматографічним аналізом для виявлення гемоглобіну та трасферину у зразках калу.

На мембрану тесту в ділянці обох тестових ліній (результативна ділянка) наносять мишачі моноклональні антитіла, специфічні до гемоглобіну та трансферину. Під час тестування в місці внесення зразку останній вступає в реакцію з фарбованим кон’югатом (антитіла до людського гемоглобіну – блакитні мікросфери та антитіла до людського трансферину - червоні мікросфери), які були заздалегідь нанесені та висушені на мембрані тесту. Потім суміш мігрує вздовж мембрани під дією капілярної сили. У випадку позитивного результату, специфічні антитіла, які присутні в результативній ділянці мембрани, будуть захоплювати фарбований кон’югат. Це буде супроводжуватись появою ліній різного кольору (блакитного або червоного) в залежності від того, гемоглобін чи трансферин присутній у зразку. При подальшому проходженні суміші вздовж мембрани до імобілізованих антитіл, розміщених на контрольній ділянці тесту з’являється лінія зеленого кольору. Наявність цієї зеленої лінії служить підтвердженням достатньої кількості використаного зразку, заповнення капілярів мембрани, а також як внутрішній контроль якості для реагентів.
Зберігання і стабільність

Зберігати тест запакованим у блістер при температурі 2-30ºC. Тест зберігає стабільність до моменту закінчення терміну придатності, вказаного на кожному блістері. Тест повинен знаходитися в закритому пакеті до моменту використання. Не заморожувати. Термін придатності 24 місяці.
Застереження

- Для професійної in vitro діагностики.

- Не використовувати після закінчення терміну

придатності.

- Всі зразки можуть вважатися як потенційно небезпечними

і поводитися з ними слід як з інфікованим матеріалом.

- Після тестування тест слід знищити в контейнер для

біологічно небезпечних матеріалів.
Забір і підготовка зразків

Зразки калу слід збирати в чисту ємкість. Тестування повинно бути проведено відразу після забору зразку.

Зразки можуть зберігатися в холодильнику (2-4ºC) протягом 1-2 днів. Для тривалого зберігання, не більш ніж 1 рік, зразки повинні зберігатися при температурі –20ºC. В даному випадку перед тестуванням зразки повинні бути розморожені і доведені до кімнатної температури.

Приготування зразку (дивись ілюстрацію):

1. Зніміть з пробірки кришечку з паличкою, за допомогою якої візміть невелику кількість зразку (приблизно 150 мг). У випадку, якщо зразок рідкий, візьміть 150 мкл калу, використовуючи піпетку та внесіть його у пробірку для тестування (1).

2. Закрийте пробірку з розчинником та зразком калу. Збовтайте пробірку для того, щоб отримати однорідну суспензію зразку (2).











Пробірка Твердий зразок або рідкий зразок

для зразку (1) (2)
Застереження: Пацієнтам не слід збирати зразок калу під час менструації, кровотечі з гемороїдальних вузлів, гематурії та після надмірного напружування під час дефекації.
Надані матеріали

- Тест

- Інструкція

- Пробірка для калу з розчинником
Необхідні, але не надані матеріали

- Пробірки

- Ємкість для забору зразку

- Одноразові рукавички

- Годинник
Процедура тестування

Доведіть тест, зразки калу до кімнатної температури (15-30ºC) перед тестуванням. Не відкривайте упаковку до повної готовності для тестування. Використання тесту можливе в двох варіантах.



  1. ^ Використання однієї упаковки блістер-тесту як тест-картки:

  1. Відріжте від блістеру одну упаковку тесту, тримаючись за незапаяний бік тесту, відкрийте його, знімаючи верхній шар фольги. Не виймайте тест із блістерної упаковки і використайте як можна швидше.

  2. Збовтайте пробірку з калом для того, щоб отримати однорідну суспензію зразку. Зріжте кінчик кришечки (3).

  3. Покладіть одну упаковку блістер-тесту горизонтально. Внесіть 5 крапель чи 150 мкл отриманого зразку на білу ділянку тесту (4). Використовуйте окрему пробірку з калом та тест-систему для кожного зразку калу. Облік результату тесту проведіть на 5 хвилині. Не приймайте до уваги результати тесту після

10 хвилини.
^ B) Використання однієї упаковки блістер-тесту як тест-смужки методом занурення:

1. Відріжте від блістеру одну упаковку тесту, тримаючись за незапаяний бік тесту, відкрийте його, знімаючи верхній шар фольги.

2. Збовтайте пробірку з калом для того, щоб отримати однорідну суспензію зразку. Зріжте кінчик кришечки (3).

3. Внесіть 10 крапель отриманого зразку в іншу пробірку (5). Тримаючи блістер-тест вертикально, занурте білим кінцем тесту в зразок, не перевищуючи межу занурення, вказаної на тесті стрілками. Витягніть та покладіть тест-смужку на горизонтальну ділянку. Облік результату тесту проведіть на 10 хвилині. Не приймайте до уваги результати тесту після 10 хвилини.


  1. Як тест-картка B) Метод занурення




Додати 10 крапель
Блакитний
Червоний

Блакитний

Червоний

Зелений

Зелений

Червоний

Ділянка результату

Додати 10 крапель

Додати 5 крапель

(5)

(3) (4)


Облік результатів (дивись малюнок)







Червоний


Зелений


Зелений

Червоний

Блакитний

Червоний



Блакитний

Блакитний




^
Тr Hb Hb та Тr НЕГАТИВНИЙ
ПОЗИТИВНИЙ НЕДІЙСНИЙ


Негативний: лише одна лінія зеленого кольору (контрольна лінія) з’явиться на білій центральній ділянці тесту (контрольна ділянка). В зразку не виявлена прихована кров (гемоглобін, трансферин).

Позитивний результат на трансферин: в доповнення до зеленої контрольної лінії також з’являється чітка червона лінія (тестова лінія на трансферин) на білій центральній зоні тесту (ділянка результату), що вказує на можливість кровотечі з верхніх відділів ШКТ (гемоглобін, ймовірно, був зруйнований у ШКТ).

Позитивний результат на гемоглобін: в доповнення до зеленої контрольної лінії також з’являється чітка блакитна лінія (тестова лінія на гемоглобін) на білій центральній зоні тесту (ділянка результату), що вказує на можливість невеликої кровотечі з нижніх відділів ШКТ (концентрація трансферину в крові у 100 разів менша, ніж гемоглобіну, отже позитивний результат на гемоглобін визначає присутність незначної кількості крові в калі).

Позитивний результат на трансферин та гемоглобін: всі лінії (зелена контрольна на контрольній ділянці, червона та блакитна лінії у ділянці результату) одночасно з’являються під час проведення тестування. Це, можливо, вказує на вірогідність комбінованої кровотечі з верхніх та нижніх відділів ШКТ або значної кровотечі з нижніх відділів ШКТ (напр., колоректальний рак).

Недійсний: відсутність контрольної лінії (зеленої) незалежно від появи чи відсутності результативних ліній (червоної/блакитної). Причинами цього може бути: недостатня кількість зразку, неправильна техніка виконання тесту чи псування реагентів. Перегляньте техніку виконання та повторіть процедуру тестування з новим тестом.
Примітка до інтерпретації результату тесту

Інтенсивність червоної/блакитної лінії на тестовій ділянці буде залежати від концентрації гемоглобіну або трансферину, присутніх у зразку. Однак, ні кількісний вміст, ні ступінь підвищення гемоглобіну чи трансферину не можливо визначити даним якісним тестом.
Контроль якості

Тест має внутрішній контрольний пристрій. Зелена лінія, яка з’являється на контрольній ділянці тесту, є тим самим внутрішнім контрольним пристроєм. Вона підтверджує достатню кількість використаного зразку і правильну техніку виконання тесту.
Обмеження

  1. Тест повинен бути проведений протягом 2 годин після відкриття запаяної упаковки.

  2. Надлишок зразку калу може стати причиною неправильного результату (з’являються коричневі лінії чи відсутня контрольна лінія). Повторіть тестування.

  3. Не слід збирати зразки калу під час менструації, при кровотечі з гемороїдальних вузлів, гематурії чи після надмірного напружування під час дефекації.

  4. Позитивний результат тестування свідчить про наявність гемоглобіну та/або трансферину у зразку калу, проте, причина появи його може бути різною: колоректальна кровотеча, геморой, гематурія чи подразнення шлунку. Наявність прихованої крові в калі слід підтвердити додатковими діагностичними процедурами для того, щоб визначити точну причину та джерело крові в калі.

  5. Негативний результат тестування не виключає кровотечу, так як деякі поліпи та колоректальні злоякісні пухлини можуть кровоточити періодично чи зовсім не кровоточити протягом певної стадії захворювання. Крім того, кров може не рівномірно розподілятися в зразку калу.


Характеристики роботи тесту

Чутливість

Зразки, які вміщують гемоглобін в концентрації 5,1 мкг/г чи вище та трансферин у концентрації 0,4 мкг/г чи вище показали позитивний результат при тестуванні їх даним тестом. Різні розведення гемоглобіну та трансферину були додані безпосередньо до негативних зразків калу і протестовані згідно інструкції для визначення порогового рівня тесту. Межі детекції було визначено як 50 нг/мл для гемоглобіну та 4 нг/мл для трансферину. Тест має чутливість >99% в порівнянні з гваяковим аналізом.

Визначення гемоглобіну у зразках калу за допомогою даного тесту показало >99% чутливості у порівнянні з іншими комерційними швидкими тестами (Immun Tech Occul Tech (YD Diagnostics), Human Hexagon OBTI).

Специфічність

Тест для виявлення гемоглобіну та трансферину у калі специфічний до гемоглобіну та трансферину людини і не показує перехресної реактивності до бичачого гемоглобіну/трансферину та гемоглобіну/трансферину свині.

Тест має специфічність >99% у порівнянні з гваяковим аналізом та >99% у порівнянні з іншими комерційними швидкими тестами (Immun Tech Occul Tech (YD Diagnostics), Human Hexagon OBTI).

Використання мишачих моноклональних антитіл у розробці тесту для виявлення гемоглобіну та трансферину у калі забезпечує високу специфічність тесту при виявленні людського гемоглобіну та трансферину.

Тільки для оцінки характеристик.
Постачальник:

ТОВ „Фармаско”

Україна, Київ, 04655, вул. В.Хвойки, 21

тел. (044) 537-08-04

e-mail: contact@pharmasco.com, www.pharmasco.com